تولید آنتی بادی پلی کلونال علیه ژیاردیا لامبلیا در خرگوش

چکیده مقدمه: ژیاردیا لامبلیا یکی از شایع‌ترین تک یاخته‌های روده‌ای انسان در سراسر جهان می‌باشد. تشخیص آن عمدتاً از طریق مشاهده مستقیم صورت می‌گیرد ولی روشهای مبتنی بر ELISA، IFA، بعنوان تکنیکهای برتر، کاربردهای تحقیقاتی و اپیدمیولوژیکی دارد. برای طراحی تستهای قدرتمند با قدرت تشخیصی بالا نظیر دیپ استیک و یا کیت‌های تشخیصی سریع، اولین قدم تولید آنتی‌بادی پلی‌کلونال می‌باشد. لذا بر آن شدیم تا آنتی‌بادی پلی کلونال بر ضد ژیاردیا را در خرگوش تولید نماییم. مواد و روش‌ها: با استفاده از روش تغییر یافته گرادیان دو مرحله‌ای سوکروز، کیست‌ها خالص‌سازی شدند و غلظت آن‌ها به تعداد 1×106/ml در PBS رسانده شد و به خرگوش در چندین مرحله به فاصله سه هفته تزریق شد. تزریق مرحله اول با استفاده از ادجوانت کامل فروند و تزریق یادآور با استفاده از ادجوانت ناقص فروند و تزریق‌های بعدی بدون استفاده از ادجوانت بصورت عضلانی- جلدی صورت گرفت. پس از ایمونیزاسیون خرگوش، برای اثبات تولید آنتی‌بادی پلی کلونال ضد ژیاردیا و تعیین تیتر آن، تست IFA و ELISA طراحی گردید. یافته های پژوهش: نتایج بدست آمده در هر دو روش، بیانگر ایمن شدن خرگوش بود و با میزان 106 انگل و رقت سرمی 100/1 و با رقت 20/1 Goaet anti rabbit IgG کونژوگه با FITC در زیر میکروسکوپ ایمنوفلورسانس، جواب کاملا قابل قبولی گرفته شد. در الایزا هم در تیترهای با میزان /ml105 انگل و رقتهای کونژوگه 5000/1 و 10000/1، و سرمی 1000/1 و 2000/1، بهترین جوابها گرفته شد. نتیجه‌گیری نهایی: با توجه به اهمیت تشخیص آنتی ژن‌های ژیاردیایی در نمونه‌های مختلف و بالینی، تولید آنتی‌بادی پلی کلونال ضد G.Lamblia با تیتر بالا قدم اول و مهمی در راستای طراحی کیت‌های IFA و الایزای مستقیم با هدف تشخیص مستقیم آنتی‌ژن‌های ژیاردیا به شمار می‌رود که می‌توان در مراحل بعدی نسبت به خالص‌‌سازی آنتی‌بادی تولیدی و کونژوگه نمودن آن با آنزیم اقدام نمود.